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          研域課堂:細胞傳代的辦法您做對了嗎?

          發(fā)布時間: 2019-08-23  點擊次數: 1510次

          經過自主研發(fā)和吞并重組不斷擴展企業(yè)產品線,逐漸發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務集成供應商,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者。開端細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否*。

           

          一:細胞與試劑方面:

          1、細胞(單層細胞,鏡檢合適)

          2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細胞有要求的培養(yǎng)液)

          3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

          4、7.5%NaHC03 溶液

          5、0.25%胰蛋白酶

          6、 PBS 洗液。

          二:實驗小用具方面:

          1、小方瓶(100m1)

          2、克氏瓶

          3、膠塞

          4、吸管(10ml、1m1)

          5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

          6、C02 孵箱

          7、超凈臺

          8、倒置顯微鏡

          9、4℃、- 20℃冰箱
           
          三:細胞傳代的操作過程

          1、選擇細胞:鏡檢細胞,選擇成長狀態(tài)杰出,細胞界限明晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細胞。

          2、配制細胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內,加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

          3、消化細胞:先用PBS 洗液沖洗細胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞外表。

          4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細胞培養(yǎng)液吹打渙散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。

          5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

          6、填寫傳代記載。

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